Меню

Сухой латексный агглютинационный тест для быстрой идентификации streptococcus pneumoniae

Сухой латексный агглютинационный тест для быстрой идентификации streptococcus pneumoniae

Реакция Кумбса. Выявление неполных антител ( AT ). Метод латекс-агглютинации. Реакция латекс-агглютинации.

Реакция Кумбса. Метод выявляет неполные (одновалентные) AT, образующиеся при бруцеллёзе, резус-конфликте или системных коллагенозах. Реакция также известна как антигло-булиновый тест. Для постановки реакции необходима антиглобулиновая сыворотка, содержащая полные (как минимум двухвалентные) AT.

Неполные AT предварительно инкубируют с корпускулярным Аг и вносят антиглобулиновую сыворотку. Одна молекула полных AT взаимодействует с двумя молекулами неполных AT, связавших Аг, в результате происходит видимая агглютинация или гемагглютинация (рис. 10-15).

Реакция Кумбса. Выявление неполных антител ( AT ). Метод латекс-агглютинации. Реакция латекс-агглютинацииРис. 10-15. Выявление неполных антител ( AT ) (проба Кумбса). Соединение неполных AT (А) с Аг (Б) не вызывает агглютинации (1). Добавление антиглобулиновой сыворотки (В) приводит к появлению видимой агглютинации (2).

Метод латекс-агглютинации. В последние годы ассортимент диагностикумов из убитых микробов дополнили так называемые суспензионные Аг и AT, сорбированные на различных инертных корпускулярных носителях. Среди них наибольшее распространение нашёл метод латекс-агглютинации, основанный на взаимодействии Аг (или AT) в образце с частицами латекса, нагруженными специфическими моноклональными AT (или Аг), что ведёт к быстрому образованию видимых агрегатов.

Учёт результатов проводят через 10-15 мин при косом освещении на тёмном фоне. Разработаны коммерческие диагностикумы для выявления Аг Streptococcus pneumoniae, стрептококков группы В, Haemophilus influenzae типа b и капсулированных штаммов менингококка в различных тканевых жидкостях (СМЖ, сыворотке крови, моче). Также имеются наборы для выявления Аг стрептококков группы А в мазках из зева; для первичной экспресс-идентификации колоний стрептококков групп А, В, С, F, энтерококков, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae типов a-f, золотистого стафилококка, Neisseria meningitidis и Neisseria gonorrhoeae.

— Вернуться в оглавление раздела «Микробиология.»

Источник



Латексная агглютинация (наборы для диагностики)

Латексная агглютинация

Наборы для идентификации и дифференциации микроорганизмов из клинического материала или из чистой культуры методом латексной агглютинации.

Выпускаются в двух форматах:

1) Жидкие

Латексный реагент представлен в жидкой форме, хранение при + 2-8° С 1 год

2) «Сухие» (DrySpot)

Латексный реагент нанесен на реакционную карточку и лиофилизирован, хранение при + 2-25° С до 2 лет

Артикул

Название (русское/английское)

Фасовка

Описание

Бактериальный менингит

Набор Wellcogen на менингококковые инфекции/Wellcogen Bacterial Antigen Kit

Быстрый тест для прямого определения антигенов в жидкостях тела методом латексной агглютинации (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды):

— Streptococcus гр. B

— H. influenzae тип b

— N. meningitidis групп A, C, Y, W135

— N. meningitides гр. B/E.coli K1.

  • Время реакции – 3 минуты
  • Чувствительность – 97% *
  • Специфичность – более 98%
  • В состав набора входят все необходимые компоненты

*для Н. influenzae тип b

Набор Wellcogen для определения H. influenzae b/Wellcogen Haemophilus influenzae b Test Kit

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Набор Wellcogen для определения N. meningitidis A, C, Y, W 135/Wellcogen Neisseria meningitidis A, C, Y, W135 Test Kit

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Набор Wellcogen для определения N. meningitidis B/E. coli K1/Wellcogen Neisseria meningitidis B/E. coli K1

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Набор Wellcogen для определения стрептококков группы B/Wellcogen Strep B Rapid Latex Agglutination Test

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Набор Wellcogen для определения Streptococcus pneumoniaе/Wellcogen Streptococcus pneumoniae Test Kit

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Streptococcus

Набор для диагностики стрептококков групп A, B, C, D, F и G /PathoDxtra Strep Grouping Kit

Быстрый тест для дифференциации групп стрептококков A, B, C, D, F и G по Лансфильду с первичных чашек с культурой.

Набор для диагностики стрептококков групп A/PathoDxtra Strep Group A Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп B/PathoDxtra Strep Group B Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп C/PathoDxtra Strep Group C Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп D/PathoDxtra Strep Group D Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп F/PathoDxtra Strep Group F Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп G/PathoDxtra Strep Group G Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор Streptex для диагностики групп стрептококков A, B, C, D, F и G (ферментная экстракция)/Streptex

Набор для идентификации стрептококков групп A, B, C, D, F, G по Лансфильду с использованием ферментной экстракции

Набор для диагностики стрептококков групп A, B, C, F и G (кислотная экстракция)/Streptex Rapid

Набор для идентификации стрептококков групп A, B, C, F, G по Лансфильду с использованием кислотной экстракции

Набор для быстрой диагностики стрептококков групп A, B, C, F и G (кислотная экстракция)/Streptex Acid Extraction Kit

Набор для быстрой кислотной экстракции для использования с Streptex Rapid Latex Agglutination Test для идентификации стрептококков групп A, B, C, F, G по Лансфильду

Набор DrySpot для диагностики Streptococcus pneumonia/Pneumo

Сухой латексный тест для подтверждения Streptococcus pneumoniae в культурах на чашках или положительных культурах крови.

Staphylococcus и MRSA (метициллин-резистентный стафилококк)

Набор DrySpot для идентификации Staphylococcus aureus (MRSA)/Dryspot Staphytect Plus

Сухой латексный тест для идентификации S. aureus после первичного посева

Плазма кроличья для выявления коагулазы (лиофилизированная)/Coagulase Plasma (lyphohilized)

Реагент для выявления фермента коагулазы у стафилококков

Источник

Латексная тест-система ГБМ Оболенск

Диагностический набор реагентов для быстрой идентификации возбудителей гнойных бактериальных менингитов Haemphilus influenza тип b,Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitides типа А, Neisseria meningitides типа В, Neisseria meningitides тип С и Neisseria meningitides тип W 135 в рекции латекс-агглютинации, жидкий

Латексная тест-система ГБМ Оболенск

Инструкция по применению Диагностического набора реагентов для быстрой идентификации возбудителей гнойных бактериальных менингитов – Haemophilus influenzae тип b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis тип A, Neisseria meningitidis тип B, Neisseria meningitidis тип С и Neisseria meningitidis тип W 135 в реакции латекс-агглютинации, жидкого (Латексная тест-система ГБМ)

Назначение тест-системы

Латексная тест-система ГБМ Оболенск предназначена для быстрой идентификации возбудителей гнойных бактериальных менингитов –Haemophilus influenzae тип b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis тип A, Neisseria meningitidis тип B, Neisseria meningitidis тип С и Neisseria meningitidis тип W 135 методом латекс-агглютинации при проведении клинических лабораторных исследований.

Читайте также:  Метод административного права предполагает тест

Латексная тест-система ГБМ обеспечивает типоспецифическое выявление и идентификацию микробных клеток ГБМ непосредственно в образцах спинномозговой жидкости или крови, полученных от больных людей с клиническими симптомами менингита, а также в суспензиях, полученных из колоний микроорганизмов, выращенных на плотных питательных средах.

2.Аналитические и диагностические характеристики тест-системы

Диагностическая чувствительность Латексной тест-системы ГБМ – не менее 80%, диагностическая специфичность – не менее 90%

Латексный тест H. influenzae b (фл. № 1) должен давать реакцию агглютинации латекса (РАЛ) с микробной взвесью H. influenzae тип b, штамм 411 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест H. influenzae b (фл. № 1) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: S. pneumoniae, штамм ATCC 49619; N. meningitidis тип A, штамм M4060;

  1. N.meningitidis тип B, штамм M5148; N.meningitidis тип С, штамм M3045 и N.meningitidis тип W135, штамм M7037 в концентрациях 10 9 м.к./мл.

Латексный тест S. pneumoniae (фл. № 2) должен давать РАЛ с микробной взвесью S. pneumoniae штамм ATCC 49619 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест S. pneumoniae (фл. № 2) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; N. meningitidis тип A, штамм M4060;
N. meningitidis
тип B, штамм M5148; N. Meningitidis тип С, штамм M3045 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрациях 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis A (фл. № 3) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип A, штамм M4060 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis A (фл. № 3) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis тип B, штамм M5148; N. meningitidis тип С, штамм M3045 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis B (фл. № 4) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип B, штамм M5148 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis B (фл. № 4) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis тип A, штамм M4060; N. meningitidis тип С, штамм M3045 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis С (фл. № 5) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип С, штамм M3045 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis С (фл. № 5) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis тип A, штамм M4060; N. meningitidis тип B, штамм M5148 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрации 10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis W 135 (фл. № 6) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 на 3(+)-4(+) в концентрации
10 9 м.к./мл.

Латексный тест N.meningitidis W 135 (фл. № 6) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis
тип A, штамм, M4060; N. meningitidis тип B, штамм M5148 и N. meningitidis тип С, штамм M3045 в концентрации 10 9 м.к./мл.

Принцип действия Латексная тест-система ГБМ Оболенск

Микробные клетки возбудителей ГБМ, присутствующие в исследуемой пробе, взаимодействуют с латексными частицами, сенсибилизированными антителами против полисахаридных антигенов возбудителей ГБМ с последующим образованием видимых агглютинатов. Специфическими мишенями данного теста являются полисахаридные антигены капсул возбудителей гнойных бактериальных менингитов.

Состав тест-системы

Латексная тест-система ГБМ Оболенск представляет собой набор, состоящий из 13 флаконов:

  • флакон №1 (латексный тест H.influenzaeb), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену капсулы тип bHaemophilusinfluenzae тип b (HIb);
  • флакон №2 (латексный тест S.pneumoniae), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Streptococcuspneumoniae;
  • флакон №3 (латексный тест N.meningitidisA), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Neisseriameningitidis тип A;
  • флакон №4 (латексный тест N.meningitidisB), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Neisseriameningitidis тип B;
флакон №5

(латексный тест N.meningitidis С), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Neisseria meningitidis тип С;

  • флакон №6 (латексный тест N.meningitidisW135), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену N.meningitidis тип W135;
  • флакон №7 (позитивный контроль H.influenzaeb), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Haemophilusinfluenzae тип b,штамм 411(Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского), концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.
  • флакон №8 (позитивный контроль S.pneumoniae), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Streptococcuspneumoniae, штамм 19F, ATCC 49619, концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.
  • флакон №9 (позитивный контроль N.meningitidisA), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Neisseriameningitidis тип A, штамм M4060 (Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского), концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.
  • флакон №10 (позитивный контроль N.meningitidisB), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Neisseriameningitidis тип B, штамм M5148 Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского), концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.
  • флакон №11 (позитивный контроль N.meningitidisС), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Neisseriameningitidis тип С, штамм M3045 (Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского), концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.
  • флакон №12 (позитивный контроль N.meningitidisW135), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Neisseriameningitidis тип W 135, штамм M7037 (Государственная коллекция патогенных микроорганизмов ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского), концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.
  • флакон №13 (контрольный латексный тест), содержит 0,5 % взвесь частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса, сенсибилизированного иммуноглобулинами из сывороток крови не иммунизированных кроликов;
  • Читайте также:  Исход глпс геморрагической лихорадки с почечным синдромом тест

    Меры предосторожности

    Потенциальный риск применения Латексной тест-системы ГБМ класс 3 (Приказ МЗ РФ №4н от 06.06.2012г)

    Подготовку материала для исследования, его обезвреживание, а также уничтожение использованных реагентов Латексной тест-системы ГБМ проводят с соблюдением специальной техники безопасности в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и возбудителями паразитарных болезней», Методических указаний МУК 4.2.1887-04 «Лабораторная диагностика менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами».

    Утилизацию неиспользованных тест-систем с истекшим сроком годности проводят любым способом, предотвращающим повторное использование по назначению.

    Материалы и оборудование

    7.Анализируемые образцы

    7.1.Образцы спинномозговой жидкости или крови, полученные от больных людей с подозрением на гнойный бактериальный менингит.

    7.2.Колонии микроорганизмов, выделенных из клинического материала, выращенные на плотных питательных средах в микроаэрофильных условиях в течение 24-48 часов при температуре 37 °С.

    Примечание – Анализируемые образцы не подвергать автоклавированию.

    1. Подготовка к выполнению анализа

    Извлечь из холодильника Латексную тест-систему ГБМ и выдержать при комнатной температуре 20 минут.

    Примечание – перед применением латексный тест тщательно суспендировать до гомогенного состояния.

    Латексная тест-система ГБМ Оболенск

    9.Проведение анализа

    Взятие, посев и хранение исследуемого материала проводить в соответствии с МУК 4.2.1887-04 «Лабораторная диагностика менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов»

    9.1. Анализируемый образец ( по п.7.1.) объемом по 0,02 мл, механическим дозатором 6 раз нанести на предметное стекло в виде капель, затем внести в каждую полученную каплю образца по 0,015 мл одного из специфических латексных тестов из флаконов №1-6 и оба компонента в каждой капле осторожно перемешать стеклянной палочкой (для каждой смеси отдельной палочкой) до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.

    9.2. Идентификация микробных клеток ГМБ ( по п 7.2.): из колоний, выросших на плотной питательной среде – на предметное стекло нанести 20 мкл физиологического раствора, стеклянной палочкой снять часть колонии тестируемого штамма (исследуемый образец) и растереть в капле физиологического раствора до получения гомогенной суспензии. Далее проводить идентификацию по п.9.1.

    9.3. Проверка качества контрольного латексного теста. К 0,02 мл анализируемого образца, нанесенного на предметное стекло, добавить 0,015 мл контрольного латексного теста (флакон №13) и оба компонента осторожно перемешать стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.

    9.4 Контроль специфичности латексного теста. К 0,02 мл позитивного контроля (флаконы №7-12), нанесенного на предметное стекло, добавить 0,015 мл специфического латексного теста (флаконы № 1-6) и оба компонента осторожно перемешать стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.

    Регистрация и учет результатов Латексная тест-система ГБМ Оболенск

    Учет результатов по п. 9.1;.9.2;.9.3. провести через 2 минуты, руководствуясь таблицей и иллюстрацией.

    Таблица 1 – Интерпретация результата (Пример идентификации Haemophilus influenzae тип b)

    Наличие видимой четкой окрашенной агглютинации частиц после добавления к позитивному контролю H. influenzae b (флакон №7) латексного теста H. influenzae b (флакон №1).

    Отсутствие агглютинации, фон равномерно мутный после добавления к исследуемому образцу контрольного латексного теста (флакон №13).

    Наличие видимой четкой окрашенной агглютинации частиц после добавления к позитивному контролю H. influenzae b (флакон №7) латексного теста H. influenzae b (флакон №1).

    Условия хранения и эксплуатации латексной тест-системы

    «Диагностический набор реагентов для быстрой идентификации возбудителей гнойных бактериальных менингитов – Haemophilus influenzae тип b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis тип A, Neisseria meningitidis тип B, Neisseria meningitidis тип С и Neisseria meningitidis тип W 135 в реакции латекс-агглютинации, жидкого (Латексная тест-система ГБМ Оболенск)» необходимо хранить в закрытых флаконах в защищенном от света месте при температуре 2-8 ºС. После первого вскрытия флаконы с реагентами Латексной тест-системы ГБМ до окончания срока годности необходимо хранить в закрытых флаконах в защищенном от света месте при температуре 2-8 ºС .

    Латексную тест-систему ГБМ транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения или при температуре от 2 до 25 ºС в срок не более 7суток.

    Примечание – Не замораживать.

    Срок годности – 1 год. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

    По вопросам, касающимся качества «Диагностического набора реагентов для быстрой идентификации возбудителей гнойных бактериальных менингитов – Haemophilus influenzae тип b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis тип A, Neisseria meningitidis тип B, Neisseria meningitidis тип С и Neisseria meningitidis тип W 135 в реакции латекс-агглютинации, жидкого (Латексная тест-система ГБМ Оболенск)» в течение срока годности следует обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279, Московская область, Серпуховский район, пос.Оболенск, тел.8 (4967) 36-01-16.

    Источник

    Реакция латекс-агглютинации

    Историческая справка

    Впервые метод реакции латекс-агглютинации (РЛА) был предложен в 1956 году и использован для определения ревматоидного фактора с помощью полистирольных латексных микросфер с узким распределением частиц по размеру, покрытых гамма-глобулином человека. Сообщалось, что взаимодействие антигенов, находящихся в сыворотке крови пациента, с гамма-глобулином, адсорбированным на поверхности гидрофобных микросфер суспензии, привело к агглютинации полимерных частиц и образованию крупных агломератов, легко различимых невооруженным глазом. В последующие годы метод РЛА получил широкое распространение, как в клинических диагностических тестах, так и в биохимических и иммунологических исследованиях. Особенно широкое применение РЛА наблюдается в инфекционной патологии.

    Описание метода реакции латексной агглютинации

    Реакция латексной агглютинации используется в клинической химии в течение многих лет как простой, быстрый и недорогой метод определения белков, гормонов и других биологически активных соединений. Белки, являясь поливалентными антигенами, вступают в реакцию с антителами с образованием иммунных комплексов, или агглютинатов. Как правило, иммунные комплексы слабо визуализируются не только невооруженным глазом, но и с помощью фотометрических методов. Использование дисперсионных полимеров (латексов), сенсибилизированных антителами или антигенами, позволяет значительно облегчить детекцию реакции агглютинации, которая в этом случае называется реакцией латексной агглютинации.

    Читайте также:  Тест дисков для штробореза

    Носители для метода реакции латексной агглютинации

    Наиболее часто для получения диагностических препаратов используют полистирольные микросферы, несущие на своей поверхности различные функциональные группы (карбоксильные, эпоксидные, альдегидные и др.) и полиакролеиновые микросферы, содержащие на своей поверхности альдегидные функциональные группы, способные вступать в реакцию с первичными аминогруппами, образуя основание Шиффа Применение инертных синтетических носителей для иммобилизации антител (или антигенов) является широко распространенным методическим подходом в иммуноанализе.

    Полимерные микросферы с узким распределением частиц по размерам и функциональными группами на поверхности представляют большой интерес для биологии и медицины, в частности для использования в качестве носителей биолигандов вместо эритроцитов при создании диагностических тест-систем на различные виды заболеваний. Замена эритроцитов на полимерные микросферы является решением проблем, связанных с недостатками эритроцитарных диагностикумов, а именно:

    • 1)​ эритроциты получают из крови животных, содержание которых трудоемко и дорогостояще
    • 2)​ эритроциты содержат много антигенных детерминант, которые реагируют с компонентами сывороток человека и животных, что обуславливает протекание неспецифических реакций и приводит к ложноположительным результатам
    • 3)​ свойства эритроцитов часто зависят от источника и способа их выделения
    • 4)​ диагностикум на основе клеток одних и тех же животных не дает постоянный титр и после длительного хранения не сохраняет прежнюю степень агглютинации.

    Для замены эритроцитов, полимерные микросферы должны обладать определенными свойствами: скорость седиментации 3 – 8 мм/час, диаметр частиц порядка 5 мкм., агрегативная устойчивость в воде и буферных растворах высокой ионной силы, наличие в поверхностном слое функциональных групп, доступных для ковалентного связывания с функциональными группами белков.

    Одним из преимуществ применения полимерных микросфер в качестве носителей биолигандов является возможность получения полимерных частиц с заданным комплексом свойств. Для устранения проблем, связанных с применением эритроцитов, используются полимерные микросферы с определенными свойствами:

    • 1)​ монодисперсное распределение по размерам
    • 2)​ сферическая форма
    • 3)​ устойчивость к электролитам в широком интервале pH
    • 4)​ способность присоединять биологические макромолекулы без значительного изменения их функциональной активности
    • 5)​ воспроизводимые свойства и характеристики

    Однородность частиц по размерам позволяет достаточно точно определить площадь поверхности носителя и установить степень ее покрытия биолигандом, кроме того, она обусловливает сходный характер их поведения во время агглютинации, что облегчает “прочтение” результатов реакции латекс-агглютинации(РЛА). Впервые, для создания диагностических тест-систем были использованы полистирольные микросферы. Полистирол, благодаря своей оптической прозрачности, высокой адсорбционной способности, прочности и хорошей воспроизводимости свойств, успешно используется в качестве носителя.

    Главной проблемой полимерных микросфер, используемых при создании диагностикумов является неспецифическая агглютинация(частицы отрицательного контроля образуют ореол из частиц вокруг центра дна лунки) , причины которой и факторы ее вызывающие во многом еще не ясны. Наибольшее распространение в качестве способов уменьшения неспецифического связывания нашли значительное разбавление образцов, добавление детергентов, экранирование поверхности частиц низкомолекулярными белками. Однако применение данных методов чаще всего приводит к уменьшению чувствительности и точности реакции латексной агглютинации.

    При тщательной отработке методики получения латексных диагностикумов, соблюдении оптимальных условий их приготовления и постановки самой реакции, РЛА может приближаться к самым современным иммунологическим методам.

    РЛА сходна с РНГА по принципу сорбции антител на поверхности более крупных частиц.

    Преимущества метода РЛА

    Реакция РЛА — экспресс-метод диагностики инфекционных болезней (время проведения — до 10 мин, возможно обнаружение антигена в небольшом объёме исследуемого материала). Для постановки РЛА используют стеклянные или темнопольные пластины.

    РЛА в качестве сигнального экспресс-теста для выявления антигенов микроорганизмов удобна при использовании в практических лабораториях, а также при проведении массовых обследований. К преимуществам РЛА, как метода серологической диагностики бактериальных и вирусных инфекций, можно отнести следующие моменты:

    • — высокую специфичность и чувствительность;
    • — отсутствие необходимости в сложной аппаратуре для постановки и реакции и регистрации результатов;
    • — сведение до минимума количества компонентов реакции;
    • — возможность получения инертных носителей с заданными характеристиками.

    Относительная дешевизна метода реакции латексной агглютинации (РЛА), простота и возможность постановки теста практически в любых условиях делают его очень удобным как при одиночных, так и при массовых исследованиях даже в небольших клинических мало оборудованных лабораториях.

    Применение метода реакции латексной агглютинации

    РЛА применяют для индикации антигенов Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae типа b( Neisseria meningitidis в СМЖ, выявления стрептококков группы А в мазках из зева, в диагностике сальмонеллёзной инфекции, иерсиниозов и других заболеваний. Чувствительность метода — 1-10 нг/мл (103-106 бактериальных клеток в мл). Недостаток метода — возможность получения артефактов, особенно в присутствии ревматоидных факторов и продуктов фибринолиза плексы с участием комплемента — преципитаты. Простейший пример качественной реакции преципитации — образование непрозрачной полосы преципитации в пробирке на границе наслоения антигена на иммунную сыворотку (реакция кольцепреципитации). Реакцию преципитации проводят в гелях агара, агарозы. Их используют для выявления и изучения свойств разнообразных антигенов и антител.

    Материалы и реагенты для метода реакции латексной агглютинации

    • 1. Суспензия латекса. Для приготовления диагностикумов обычно используют частицы латекса диаметром 0,81…1 мкм. При применении более крупных частиц диаметром 0,22…0,3 мкм затруднен учет реакции и технологический процесс получения диагностикумов резко усложняется, а частиц более 1 мкм хотя не влияет на активность латексных диагностикумов, но существенно увеличивает частоту неспецифических реакций. Для постановки РАЛ лучше использовать очищенные латексы с гомогенными частицами правильной сферической формы. Густота суспензии латекса обычно составляет 1 %, но может достичь в отдельных случаях 1,3…1,4 %.
    • 2. Буферные растворы. Для приготовления суспензии сенсибилизированных частиц латекса может быть использован изотонический раствор хлорида натрия, однако целесообразнее применять буферные растворы: трисовый (pH 7,2…8,2), трис-солянокислый (pH 7,2), глициновый (pH 8,2), гликолевый, боратно-солевой и др. В этом случае желательно проводить предварительную апробацию системы «латекс — буфер» в экспериментальных условиях и выбор оптимального варианта для практической работы. Иногда в процессе приготовления латексного диагностикума возникает необходимость в использовании нескольких различных буферных растворов.
    • 3. Антитела. Для сенсибилизации частиц латекса пригодны гипериммунные сыворотки, полученные при иммунизации лабораторных животных (кроликов, крыс, мышей и др.). Повышению специфичности РАЛ и уменьшению числа ложноположительных и перекрестных реакций способствует применение очищенных иммуноглобулиновых фракций.

    Источник